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技术文章

H22;小鼠肝癌细胞培养说明书

点击次数:702   发布时间:2017/10/19 9:07:05

                              上海酶研生物科技有限公司

 

              

培养操作及注意事项说明

 

 

.产品简介

 

1细胞名称H22;小鼠肝癌细胞

 

2、生长特性:    □ 贴壁   □ 悬浮   □半悬浮半贴壁

 

3、细胞生长条件:

培养条件   

90%1640+10%FBS+1%双抗

温度                   

             37℃

空气条件  

5% CO2,,95% AIR

传代方法

1:2传代,2~3天换液

冻存条件

90%FBS+10%DMSO

 

二.使用方法

1收到细胞后,请按照以下方法进行操作

取出细胞培养瓶75%酒精擦拭培养瓶拆下封口膜,放入375%CO2细胞培养箱中静置2-3小时以稳定细胞状态,然后离心换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代

 

2细胞传代:

待细胞达到一定密度(不超过1x10^6/ml)可按照以下方法换液培养或传代

方法:收集细胞,1000rpm离心5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1213的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1213的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3细胞冻存:

1细胞悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min

2用适量的冻存液(FBSDMSO=9 1)重悬细胞,并放置于冻存管中;

3)先将细胞冻存管放置于-201.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80 

4、细胞复苏:
1从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37水浴中解冻,直至冻存管中结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含10ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min

3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃5%CO2细胞培养箱中培养;

4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

 

 

注:悬浮细胞运输中会有少些细胞因为碰撞裂解产生碎片,收到细胞如碎片较多时,胎牛血清可以用15%培养三天,利于细胞尽快恢复状态,细胞稳定后再调回10%即可(正常条件下20%培养的可加至25%)。

 

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